应用简介
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
技术原理
PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期。
实验方法
注意事项
细胞周期检测时,一定不要洗涤。不同于蛋白染料和细胞之间的牢固结合,DNA与染料的结合是一种结合态和游离态之间松散的平衡,不是很牢固,所以洗涤步骤会造成染料丢失,降低核酸的特异性荧光,造成测量值变小。