EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay），即电泳迁移率变动分析，是一种强大的分子生物学工具，专门用于检测和分析蛋白质与DNA或RNA之间的特异性结合。该技术不仅能够定性揭示结合事件的发生，还能通过竞争实验进行一定程度的定量分析。EMSA实验依据探针标记方式的不同，可分为两类：放射性同位素标记探针和非放射性标记探针。

实验原理

实验过程中，首先将目标蛋白质（源自纯化蛋白、部分纯化蛋白或细胞提取液）与放射性或非放射性标记的DNA/RNA探针共同孵育，形成蛋白质-核酸复合物。这些复合物随后在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离，与未结合的自由探针分开。由于复合物的电泳迁移速率较单独的探针慢，通过凝胶成像即可直观观察到特异性的条带，表明蛋白质与特定DNA/RNA序列的结合。

实验步骤概览

1. 探针标记：使用放射性同位素（如32P）或非放射性标记技术标记DNA或RNA探针。

2. 探针纯化：去除未标记或多余的标记物质，确保探针的纯净度。

3. EMSA凝胶准备：配置适宜浓度的聚丙烯酰胺凝胶。

4. 结合反应：在适宜条件下，使标记探针与蛋白质样本混合孵育，形成复合物。

5. 竞争反应：引入未标记的竞争探针（特异性和非特异性序列），以验证结合的特异性和亲和力。

6. Super-shift反应：加入特异性抗体以检测复合物中特定蛋白质的存在，导致更慢的迁移（超移位）。

7. 电泳与分析：进行电泳分离，随后通过放射自显影或化学发光等方法检测并分析复合物条带。

服务详情

提供全面的EMSA实验服务，包括但不限于探针标记、结合反应操作、竞争性及Super-shift实验，并进行电泳分离。服务成果包括电子版的实验结果扫描图，以及详细的灰度值分析，以量化结合效率。每份凝胶可支持1至7个样本的检测，满足不同研究规模的需求。通过这些精细的操作与分析，EMSA实验成为研究转录因子活性、RNA结合蛋白功能及基因表达调控机制等领域不可或缺的实验手段。