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细胞实验外包-EMSA实验

阅读数:15 时间:2024-05-29 来源:admin

EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay),即电泳迁移率变动分析,是一种强大的分子生物学工具,专门用于检测和分析蛋白质与DNA或RNA之间的特异性结合。该技术不仅能够定性揭示结合事件的发生,还能通过竞争实验进行一定程度的定量分析。EMSA实验依据探针标记方式的不同,可分为两类:放射性同位素标记探针和非放射性标记探针。


实验原理

实验过程中,首先将目标蛋白质(源自纯化蛋白、部分纯化蛋白或细胞提取液)与放射性或非放射性标记的DNA/RNA探针共同孵育,形成蛋白质-核酸复合物。这些复合物随后在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离,与未结合的自由探针分开。由于复合物的电泳迁移速率较单独的探针慢,通过凝胶成像即可直观观察到特异性的条带,表明蛋白质与特定DNA/RNA序列的结合。

实验步骤概览

  1. 探针标记:使用放射性同位素(如32P)或非放射性标记技术标记DNA或RNA探针。

  2. 探针纯化:去除未标记或多余的标记物质,确保探针的纯净度。

  3. EMSA凝胶准备:配置适宜浓度的聚丙烯酰胺凝胶。

  4. 结合反应:在适宜条件下,使标记探针与蛋白质样本混合孵育,形成复合物。

  5. 竞争反应:引入未标记的竞争探针(特异性和非特异性序列),以验证结合的特异性和亲和力。

  6. Super-shift反应:加入特异性抗体以检测复合物中特定蛋白质的存在,导致更慢的迁移(超移位)。

  7. 电泳与分析:进行电泳分离,随后通过放射自显影或化学发光等方法检测并分析复合物条带。

服务详情

提供全面的EMSA实验服务,包括但不限于探针标记、结合反应操作、竞争性及Super-shift实验,并进行电泳分离。服务成果包括电子版的实验结果扫描图,以及详细的灰度值分析,以量化结合效率。每份凝胶可支持1至7个样本的检测,满足不同研究规模的需求。通过这些精细的操作与分析,EMSA实验成为研究转录因子活性、RNA结合蛋白功能及基因表达调控机制等领域不可或缺的实验手段。