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经验分享之裸鼠成瘤(CDX模型)

阅读数:18 时间:2024-05-22 来源:admin


细胞株移植瘤模型(cell derived xenograft, CDX),即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠,也就是我们平时所说的裸鼠成瘤。裸鼠成瘤实验,即在裸鼠皮下注入肿瘤细胞,观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。

动物选择

一般选择4-6周龄Nude裸鼠,需要提前到SPF环境中适应1周。

接种部位与接种细胞量

接种部位常为皮下,静脉或原位;细胞量一般是5*106个/200ul,但是不同的细胞系的接种量略有差别。

成瘤时间

皮下接种的细胞一般会在1-2周成瘤,一般不会超过1个月;尾静脉和腹腔接种的细胞一般也是1周左右,需要密切观察动物的体重与状态进行判断。

为什么肿瘤不长?

如果细胞接种后超过预期的观察时间仍未成瘤,需要从一下方面进行排查原因:一是细胞活力,细胞活力是影响肿瘤形成的重要原因,活力不够不能成瘤,因此细胞消化下来PBS清洗后要尽快接种;二是动物选择,选择的裸鼠周龄不宜过大,否则也会增大成瘤难度(如果还未成瘤建议更换缺陷程度更高的Nod-scid小鼠,NOG小鼠);三是饲养环境,环境影响动物状态,状态差的鼠容易发生死亡,不易成瘤。

为什么瘤子长起来又消失?

很可能开始我们观察到的肿瘤是炎症反应,到后来肿瘤细胞被小鼠自身吸收,需要继续观察肿瘤细胞吸收之后是否还能长出来,长不出来建议分析上述原因重新实验

需要观察什么?

在肿瘤长出后,需要密切观察动物的状态,体重和瘤体积。瘤体积的测量一般采用公式V=ab2/2进行计算。动物体重的增加活着减少量,直接反应着动物的整体状态,评估肿瘤是否出现转移等。

如何判断肿瘤是否出现了转移?

第一:病理剖检。如果肿瘤出现了转移,在肝脏或者肾脏等组织上肉眼可见明显转移灶。 

第二:小动物活体成像。如果接种的肿瘤细胞带有荧光标签或者荧光素酶,可以借助小动物活体成像仪进行观察瘤细胞的大小和转移情况。 

第三:小动物核磁。小动物核磁技术可以更明细那地观察到肿瘤细胞在肝脏,肺脏或者其他器官的转移情况。 

哪些细胞能够成瘤?

目前验证过的细胞有HCT116,HePG2,A549,MKN45,AGS, CT26 ,NCI-H460,HT-29,SK-OV-3,MCF-7,B16,SGC7901,BEL-7402,BGC-823 ,PC-12等